问题：

做下游蛋白纯化时，CEX层析高载洗脱浓度反而低一些，并且重复实验相差很大，各位老哥有遇到过这种情况嘛，有这方面的group推荐下嘛

Via [feng manlou](tg://user?id=5972393322)

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网友解答：

郭: 在蛋白纯化过程中，尤其是在使用阴离子或阳离子交换色谱（CEX）时，有时会遇到一种现象，即随着洗脱盐浓度增加，目标蛋白的洗脱量并未按照预期那样相应增高或者甚至在较高盐浓度下洗脱提前或者洗脱量减少。这种现象可能是由以下几个原因造成的：

1. **蛋白-配基相互作用特性**：
– 目标蛋白与离子交换填料之间的结合力可能不是简单的离子强度依赖关系，可能存在非线性的亲和力效应，比如由于蛋白构象变化引起的额外疏水作用或其他非离子交换作用力。

2. **离子强度与蛋白稳定性和溶解度**：
– 高浓度的盐可能导致目标蛋白溶解度下降，特别是在接近其等电点时，可能发生聚集或沉淀，使得蛋白无法有效从柱上洗脱。

3. **柱子饱和或再生不足**：
– 如果色谱柱未充分平衡或在前一次使用后未完全再生，则高载量洗脱时可能出现目标蛋白过早洗脱或者洗脱效果不稳定。

4. **操作条件问题**：
– 洗脱梯度设置不当，例如梯度上升速度太快或太慢，未能有效解离所有结合的蛋白。
– 温度、流速等因素也可能影响蛋白的洗脱行为。

5. **蛋白批次间异质性**：
– 如果不同批次的重组蛋白表达或天然提取的蛋白具有一定的异质性，它们可能对离子强度有不同的响应。

要解决这个问题，您可以尝试以下策略：

– 优化洗脱曲线，包括调整盐浓度梯度、洗脱速率和洗脱缓冲液体系。
– 考虑改变pH值，特别是对于两性电解质，pH值对电荷状态有很大影响。
– 对色谱柱进行彻底的平衡和再生处理。
– 确保蛋白溶液的稳定性和适当稀释，避免高浓度下的聚集。
– 分析并记录每一步骤的实验参数，确保实验的可重复性。

此外，针对此类具体问题，您可以参考专门讨论生物制品纯化或蛋白纯化的专业论坛、研究小组或学术社群，如BioProcess International论坛、Benchling社区、Labmate Online等相关平台，以及参加线下研讨会和培训课程，与同行交流经验和寻求解决方案。同时查阅最新的文献资料，了解业界最新的研究成果和技术进展。

朔月: 你应该发小木虫。

白: 发蒲公英啊

feng: 小木虫跟蒲公英是什么

Abel: 专业生化论坛

feng: 有地址嘛 我搜了下没搜到

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Seriously: 同问